為了使您的色譜柱能發(fā)揮大的性能,敬請(qǐng)先閱讀以下說明:
1、 適用類型
Thermo 離子交換色譜柱包括:BioBasic AX,SCX,Hypersil SAX,Hypersil Gold AX, SAX 等。
2、 柱體積
色譜柱的柱體積可以通過以下公式估算:
V = 0.68 πr2L
V 為色譜柱柱體積(mL),r 為色譜柱內(nèi)徑(cm),L 為色譜柱長(zhǎng)度(cm)。
3、 色譜柱柱效測(cè)試與保存
離子交換色譜柱出廠時(shí)都經(jīng)過柱效測(cè)試,請(qǐng)參考柱效報(bào)告。
在條件允許情況下,請(qǐng)對(duì)新色譜柱進(jìn)行柱效測(cè)試。
離子交換色譜柱出廠時(shí)均保存在乙醇溶液中(如有不同,以柱效報(bào)告為準(zhǔn))。
4、 溫度
所有硅膠基質(zhì)色譜柱使用溫度應(yīng)低于 60℃。
5、 樣品
建議將樣品溶解在流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。如果使用梯度洗脫,則需要將樣品溶解在初始流動(dòng)相或極性相近的溶劑中。樣品溶液不應(yīng)含有任何顆粒物,建議使用 0.5μm 或更小粒徑的濾膜過濾。同時(shí)建議在色譜系統(tǒng)中使用在線過濾器。
6、 流動(dòng)相
所用溶劑通常為水、乙腈、甲醇等,Thermo 的離子交換色譜柱可以 100%水為流動(dòng)相, 進(jìn)行鹽的梯度洗脫。流動(dòng)相中含有機(jī)相時(shí),請(qǐng)注意降低鹽的濃度,以防止溶劑混合后鹽從流動(dòng)相中析出。更換流動(dòng)相時(shí)也要注意這一問題,可先用含較高純水的流動(dòng)相除鹽過渡。請(qǐng)將流動(dòng)相的 pH 值控制在 2-8。緩沖鹽濃度在 500 mM 以下。所有流動(dòng)相,建議當(dāng)日實(shí)驗(yàn)當(dāng)日配制,并使用 2μm 濾膜過濾。
7、 色譜柱安裝
請(qǐng)小心操作色譜柱。
不要摔、碰色譜柱,這樣會(huì)損壞色譜柱床,使色譜柱性能下降。使用合適的連接管路和接頭,確保色譜柱連接處死體積降到低(使用不銹鋼接頭時(shí)需要尤其注意)。我們建議使用 SLIPFREE 接頭,此接頭與 Thermo 色譜柱以及其他品牌色譜柱均完美匹配。
8、 色譜柱平衡
新柱在使用前,請(qǐng)預(yù)先用 20 倍柱體積甲醇/或乙腈沖洗色譜柱,然后以初始流動(dòng)相(不含鹽)沖洗 10 倍柱體積。在進(jìn)行正式分析之前,請(qǐng)使用至少 20 倍柱體積的流動(dòng)相沖洗色譜柱,以使色譜柱達(dá)到平衡。
9、 色譜柱保護(hù)
對(duì)于成分復(fù)雜的“臟”樣品以及組分未知的樣品,請(qǐng)盡量使用在線濾器或保護(hù)柱,如果可能,使用 SPE 小柱對(duì)樣品進(jìn)行前處理是更好的選擇。上述做法可以有效延長(zhǎng)色譜柱使用壽命。
10、 色譜柱清洗
常規(guī)清洗:每天完成分析之后,用 100% 水沖洗 30 倍柱體積除鹽,然后用 20% 甲醇/或乙腈沖洗 20 個(gè)柱體積,保存在 20% 甲醇/或乙腈中。
清洗強(qiáng)保留污染物:如果發(fā)現(xiàn)離子交換色譜柱柱效出現(xiàn)大幅下降,可通過如下方法
清洗離子交換色譜柱:首先用高濃度的緩沖鹽溶液清洗(濃度是流動(dòng)相的 5-10 倍,但不得超過 1M),沖洗 30倍柱體積。用 100% 水沖洗 20 倍柱體積以除鹽后,再用 100%甲醇/或乙腈清洗 30 倍柱體積。后用 20%甲醇/或乙腈水溶液(不含鹽)保存。
11、 色譜柱保存
用 100% 水沖洗 30 倍柱體積除鹽后,若短期不使用(<1 周),用 20% 甲醇或乙腈沖洗 20 倍柱體積后,保存在 20% 甲醇/或乙腈中;若需長(zhǎng)期放置(>1周),用 50% 甲醇/或乙腈沖洗 20 倍柱體積后,保存在 50% 甲醇/或乙腈中。